第201题

制备辣根过氧化酶的方法通常采用哪一种

A.戊二醛交联法

B.糖原染色法

C.免疫印迹法

D.捕获竞争法

E.酶偶联测定法

参考答案：A

解析：

戊二醛交联法，戊二醛是一种双功能团试剂，可以使酶与蛋白质或其他抗原的氨基通过它而偶联。戊二醛交联可用一步法（如连接AP），也可用二步法（如连接HRP）。制备辣根过氧化酶（HRP）抗体结合物可用二步法。

第202题

HRP与底物TMB反应后的测定波长为

A.278nm

B.450nm

C.403nm

D.492nm

E.495nm

参考答案：B

解析：

TMB是一种优于OPD的新型HRP色原底物。TMB经HRP作用后变为蓝色，加入硫酸终止反应后变为黄色，最大吸收峰波长为450nm。

第203题

酶免疫技术中酶的要求

A.易与抗体或抗原偶联，标记后酶活性保持稳定

B.酶的活性要强，催化反应的转化率高，纯度高

C.作用专一性强，酶活性不受样品中其他成分的影响

D.酶催化底物后产生的产物易于判断或测量，方法简单易行、敏感和重复性好

E.以上都是

参考答案：E

解析：

1.酶的活性要强，催化反应的转化率高，纯度高。
2.易与抗体或抗原偶联，标记后酶活性保持稳定，且不影响标记抗原与抗体的免疫反应性。
3.作用专一性强，酶活性不受样品中其他成分的影响，受检组织或体液中不存在与标记酶相同的内源性酶或抑制物。用于均相酶免疫测定的酶还要求当抗体与酶标抗原结合后，酶活性可出现抑制或激活。
4.酶催化底物后产生的产物易于判断或测量，方法简单易行、敏感和重复性好。

第204题

下列关于酶免疫技术的特点错误的是

A.将抗原抗体反应的特异性和酶高效催化反应的专一性相结合的一种免疫检测技术

B.酶标记抗体或抗原保留了抗体或抗原的免疫学活性

C.它是将酶与抗体或抗原结合成酶标记抗体或抗原

D.酶标记抗体或抗原失去了酶对底物的催化活性

E.通过利用酶催化底物反应的生物放大作用，提高了抗原抗体反应的敏感性

参考答案：D

解析：

酶免疫技术是将抗原抗体反应的特异性和酶高效催化反应的专一性相结合的一种免疫检测技术。它是将酶与抗体或抗原结合成酶标记抗体或抗原，此结合物既保留了抗体或抗原的免疫学活性，同时又保留了酶对底物的催化活性。在酶标抗体（抗原）与抗原（抗体）的特异性反应完成后，加入酶的相应底物，通过酶对底物的显色反应，对抗原或抗体进行定位、定性或定量的测定分析。它通过利用酶催化底物反应的生物放大作用，提高了抗原抗体反应的敏感性。

第205题

HRP与底物OPD反应后的测定波长为

A.278nm

B.450nm

C.495nm

D.403nm

E.492nm

参考答案：E

解析：

OPD被认为是HRP最为敏感的色原底物之一。OPD在HRP的作用下显橙黄色，加强酸如硫酸或盐酸终止反应后呈棕黄色，最大吸收峰在492nm波长。

第206题

制备酶标记物的抗原要求

A.纯度高

B.特异性好

C.效价高

D.活性高

E.亲和力强

参考答案：A

解析：

制备酶标记物的抗原要求纯度高，抗原性完整。

第207题

用于标记的HRP的RZ值应大于

A.2.4

B.3.0

C.3.5

D.1.5

E.5.0

参考答案：B

解析：

用于酶免疫技术的HRP，其RZ值应大于3.0。

第208题

被认为是HRP最为敏感的色原底物的是

A.OPD

B.OT

C.ABTS

D.TMB

E.PNP

参考答案：A

解析：

邻苯二胺（OPD）：OPD被认为是HRP最为敏感的色原底物之一。

第209题

酶免疫测定根据抗原抗体反应后是否需要分离结合的与游离的酶标记物而分为下述哪几种类型

A.均相异相

B.同相均相

C.固相均相

D.异相固相

E.固相异相

参考答案：A

解析：

酶免疫测定根据抗原抗体反应后是否需要分离结合的与游离的酶标记物而分为均相和异相这两类。

第210题

HRP与TMB反应后，加H₂SO₄终止反应前呈

A.蓝色

B.橙黄色

C.棕黄色

D.紫色

E.黄色

参考答案：A

解析：

TMB是一种优于OPD的新型HRP色原底物。TMB经HRP作用后变为蓝色，加入硫酸终止反应后变为黄色，最大吸收峰波长为450nm。

第211题

ELISA中最常用的固相载体是

A.三聚氧胺

B.聚苯乙烯

C.聚氯乙烯

D.尼龙膜

E.玻璃

参考答案：B

解析：

酶免疫技术的主要试剂为固相的抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体和与标记酶直接关联的酶反应底物。可做固相载体的物质很多，最常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后保留原来的免疫活性。聚苯乙烯为塑料，可制成各种形式，在测定过程中，它作为载体和容器，不参与化学反应，加之它的价格低廉，所以被普遍采用。

第212题

在ELISA中，哪一步骤不是ELISA的反应过程，但却是决定试验成败的关键

A.温育

B.洗涤

C.加样

D.结果判断

E.做阴阳性对照

参考答案：B

解析：

酶联免疫吸附试验（ELISA）属固相酶免疫测定方法，其基本原理为在固相载体上包被抗原或抗体后，通过抗原抗体反应使酶标抗体（或酶标抗原）结合到载体上，经洗涤使结合的酶标抗体和游离的酶标抗体分离，洗去游离的酶标抗体（或酶标抗原），加入底物显色，根据颜色深浅进行定性或定量分析。由原理可知，洗涤不是ELISA的反应过程，但直接影响实验结果。 

第213题

钩状效应是指用ELISA一步法测定肿瘤标志物时，标本浓度过（ ），实测值偏（ ）的现象，极易造成假阴性。

A.低，高

B.高，低

C.低，低

D.高，高

E.高，不变

参考答案：B

解析：

在ELISA一步法测定中，应注意钩状效应（hook effect），类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。

第214题

ELISA中最常用的酶是

A.葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶

B.β－半乳糖苷酶和辣根过氧化物酶

C.脲酶和碱性磷酸酶

D.葡萄糖氧化酶和碱性磷酸酶

E.辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶

参考答案：E

解析：

HRP是目前在酶联免疫吸附试验中应用最为广泛的标记用酶。

第215题

下列关于ELISA法错误的是

A.ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体

B.抗原测定：蛋白大分子抗原用得最多的是双抗体夹心法

C.只有单个抗原决定簇的小分子，则使用双抗原夹心法

D.酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种酶标固相免疫测定技术

E.抗体测定：通常使用间接法、双抗原夹心法、竞争法和捕获法等

参考答案：C

解析：

ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。本法有三个必要的试剂：①固相的抗原或抗体；②酶标记的抗原或抗体；③酶反应的底物。根据其测定抗原和抗体的不同而有不同的测定方法，抗原测定：蛋白大分子抗原用得最多的是双抗体夹心法，而对于只有单个抗原决定簇的小分子，则使用竞争抑制法。抗体测定：通常使用间接法、双抗原夹心法、竞争法和捕获法等。

第216题 目前抗可提取性核抗原抗体的检测方法是

A.A

B.B

C.C

D.D

E.E

参考答案：A

解析：

目前抗可提取性核抗原（ENA）抗体的检测方法有双向免疫扩散、对流免疫电泳和免疫印迹法。

第217题 标记免疫技术中发展最早的一种是

A.A

B.B

C.C

D.D

E.E

参考答案：E

解析：

荧光免疫技术是标记免疫技术中发展最早的一种。

第218题 可溶性抗原定量测定常用的方法是

A.A

B.B

C.C

D.D

E.E

参考答案：B

解析：

双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法。

第219题

ELISA双抗原夹心法检测抗体时，固相载体包被物是

A.酶标记的抗原

B.酶标记的抗体

C.未标记的已知抗原

D.未标记的抗抗体

E.未标记的已知抗体

参考答案：C

解析：

固相载体包被物是未标记的已知抗原。

第220题

用ELISA双抗体夹心法检测抗原A时，固相载体的包被物是

A.酶标记A抗体

B.未标记的抗A抗体

C.酶标抗球蛋白抗体

D.未标记抗原A

E.酶标记抗原A

参考答案：B

解析：

ELISA法中双抗体夹心法的固相载体包被物是未标记的抗待测抗原的抗体。